导读

美国Agilent科技有限公司

扎冲十三味丸（Zhachong Shisanwei Pills，测多测定成分ZSP）又名嘎日迪十三味丸、评法十三味麝香丸、蒙药十三味大鹏金翅丸、扎冲中种扎冲朱素木，味丸在蒙医临床上使用历史较长，测多测定成分此方由木香、评法诃子、蒙药甘草、扎冲中种麝香、味丸肉豆蔻、测多测定成分制草乌、评法石菖蒲、蒙药丁香、扎冲中种沉香、味丸珍珠（制）、磁石（煅）、禹粮土、珊瑚（制）共13味单药组成，具有除“协日乌素”、镇静安神、祛风通窍、舒筋活血功效，用于左痰右痪、手脚麻痹、腰腿不利、言语不清、口眼歪斜、神经麻痹、半身不遂、筋骨疼痛、关节疼痛、风湿。临床上用于治疗缺血性脑血管病（白脉病）、风湿性关节炎（协日乌素病）、面肌痉挛、周围性神经麻痹、坐骨神经痛、冠心病心绞痛等疾病。

蒙药是蒙古族历代蒙医经典医籍传承的宝贵财富，具有独特的功效。近几年研究蒙药复方的学者和研究人员逐渐增多，同时，为了顺应国际和国内的用药需求，对蒙药复方的质量控制也不再是单一成分的含量测定，而通过对多成分同时测定实现蒙药复方的多指标质量评价。一测多评法（quantitative analysis of multi-components by single-marker，QAMS）是一种采用1个成分来实现对多个成分同步监控的有效方法，近年来在蒙药复方制剂多指标成分定量测定中得到广泛应用。本实验采用QAMS法同时测定ZSP中主要活性成分没食子酸、鞣花酸、绿原酸、丁香酚、β-细辛醚、α-细辛脑、甘草酸铵、沉香四醇的含量，为蒙药ZSP的多指标质量控制提供实验依据和参考方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1260 Infinity II型高效液相，美国Agilent科技有限公司；Agilent Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Inertsil ODS-3柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；BDS HypersilTM C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；岛津LC-20A（20A）型高效液相，日本岛津科技有限公司；QUINTIX35-1CN型十万分之一电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；KQ-300VDY型医用超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

1.2 材料

ZSP，9个批次，批号1908003、1908005、1908008、1909010、1909011、1909016、1911004、1911005、1911006，内蒙古奥特奇蒙药股份有限公司。对照品没食子酸（批号110831-201605，质量分数90.8%）、绿原酸（批号110753-200413，质量分数99.3%）、鞣花酸（批号111959-201903，质量分数88.8%）、沉香四醇（批号111980-201904，质量分数98.6%）、丁香酚（批号110725-201917，质量分数99.1%）、甘草酸铵（批号110731-201619，质量分数93.0%）、α-细辛脑（批号100298-201203，质量分数100.0%）、β-细辛醚（批号112018-201802，质量分数99.3%）均购于中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 HPLC定量方法

2.1.1 色谱条件

Inertsil ODS-3柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱：0～7 min，30%甲醇；7～20 min，30%～51%甲醇；20～28 min，51%～59%甲醇；28～55 min，59%～75%甲醇；检测波长为0～7 min，271 nm（没食子酸）；7～20 min，252 nm（绿原酸、沉香四醇）；20～28 min，254 nm（鞣花酸）；28～33 min，281 nm（丁香酚）；33～45 min，257 nm（β-细辛醚、α-细辛脑）；45～55 min，237 nm（甘草酸铵）；体积流量1.0 mL/min；柱温30 ℃；进样量7 μL。该色谱条件下对照品及样品色谱图见图1。

2.1.2 混合对照品溶液制备

分别精密量取没食子酸、绿原酸、沉香四醇、鞣花酸、丁香酚、β-细辛醚、α-细辛脑、甘草酸铵对照品储备液适量，混合均匀，加甲醇进行稀释，制成含没食子酸0.184 mg/mL、绿原酸0.116 mg/mL、沉香四醇0.167 mg/mL、鞣花酸0.063 mg/mL、丁香酚0.207 mg/mL、β-细辛醚0.042 mg/mL、α-细辛脑0.025 mg/mL、甘草酸铵0.094 mg/mL的混合对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液制备

精密称取样品2.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声35 min，放冷至室温，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液经0.45 µm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.1.4 线性关系考察

将“2.1.2”项下混合对照品

溶液按照“2.1.1”项下色谱条件分别进样0.5、2.0、3.5、5.0、6.5、8.0 μL，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），对照品质量为横坐标（X）进行线性回归，各组分的回归方程及相关系数见表1。可见该方法在试验范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度试验

精密吸取“2.1.2”项下混合对照品溶液，以“2.1.1”项下色谱条件重复进样6次，记录峰面积，没食子酸、绿原酸、沉香四醇、鞣花酸、丁香酚、β-细辛醚、α-细辛脑、甘草酸铵峰面积的RSD值分别为0.40%、0.73%、0.35%、0.51%、0.93%、0.79%、1.81%、1.69%，表明在该条件下仪器精密度良好。

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